Plasmide CRISPR d'Activation (m) PTH-rP: sc-422491-ACT

Le gène murin **Pthlh** code la protéine apparentée à l’hormone parathyroïdienne (**PTH‑rP**), un régulateur sécrété et agissant localement de la croissance et de la différenciation cellulaires, qui signale principalement via **PTH1R** afin d’activer les voies dépendantes de **l’AMPc/PKA** et de la **PLC**. La PTH‑rP influence le développement osseux endochondral, le couplage ostéoblastes–ostéoclastes, ainsi que la biologie du muscle lisse et de la glande mammaire, avec des rôles supplémentaires dans les interactions épithélio‑mésenchymateuses au cours de l’organogenèse. Dans les tissus adultes, la PTH‑rP contribue à l’homéostasie calcique, au remodelage tissulaire et aux réponses de mécanotransduction. Une expression dérégulée de **Pthlh** a été associée à des anomalies de la mise en place du squelette, à des modifications du turnover osseux et à une signalisation paracrine liée aux tumeurs, pertinente pour les études du microenvironnement osseux.

PTH-rP Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pthlh sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTH-rP Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pthlh dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pthlh, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTH-rP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pthlh natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTH-rP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTH-rP dans les cellules tumorales présentant une expression de Pthlh silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.