Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTH (m): sc-422490

Présentation

Le gène murin **Pth** code l’hormone parathyroïdienne (PTH), un peptide sécrété qui maintient l’équilibre systémique du calcium et du phosphate en signalant via le récepteur **PTH1** afin de réguler le remodelage osseux, la réabsorption tubulaire rénale et l’excrétion du phosphate. La signalisation PTH dépendante des GPCR mobilise les voies **AMPc/PKA** et **PLC/PKC** et influence le couplage ostéoblaste–ostéoclaste via des médiateurs en aval tels que **RANKL** et **OPG**. Dans des contextes physiologiques, l’expression de **Pth** intègre le rétrocontrôle du calcium circulant et du métabolisme de la vitamine D pour coordonner l’homéostasie des ions minéraux. Une signalisation PTH dérégulée est largement pertinente pour la recherche sur le renouvellement osseux, les troubles du métabolisme minéral et la régulation endocrine des interactions entre rein et os.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTH (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pth dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pth, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pth à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pth pour l'étude de la signalisation de PTH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pth essentiels à la fonction de PTH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pth pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTH plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PTH plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pth. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTH plasmide HDR (m) et le PTH (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pth pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pth définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.