PTG CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404419-ACT

PPP1R3C kodiert „protein targeting to glycogen“ (PTG), eine regulatorische Untereinheit, die Proteinphosphatase 1 an Glykogenpartikel rekrutiert und die Dephosphorylierung zentraler Enzyme koordiniert, welche die Glykogensynthese und den Glykogenabbau steuern. Indem PTG die Phosphataseaktivität in der Nähe glykogenmetabolischer Komplexe organisiert, trägt es zur Feinabstimmung der zellulären Glukosespeicherung, der Energiehomöostase und der Signalweg-Verknüpfung mit nährstoffsensitiven Pfaden bei. Eine veränderte PPP1R3C-Expression oder PTG-Funktion wurde mit einer fehlregulierten Glykogenakkumulation und metabolischen Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die für insulinresponsive Gewebe relevant sind. Daher wird PPP1R3C in Modellen zur Glukoseverwertung, Stressadaptation und gewebespezifischen Stoffwechselregulation breit untersucht.

PTG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPP1R3C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PTG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPP1R3C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPP1R3C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PTG-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPP1R3C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PTG-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PTG-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPP1R3C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.