Plasmide CRISPR d'Activation (m) PTEN: sc-422475-ACT

Le gène murin *Pten* code PTEN, une phosphatase des lipides et des protéines qui s’oppose à la signalisation PI3K en déphosphorylant le PIP3, limitant ainsi l’activation de la voie AKT/mTOR et façonnant les programmes cellulaires de croissance, de métabolisme et de survie. PTEN contribue également à la stabilité du génome, au contrôle du cycle cellulaire et à la polarité cellulaire via des fonctions cytoplasmiques et nucléaires qui influencent les réponses aux dommages de l’ADN et la régulation de la chromatine. La perturbation ou la diminution de l’expression de PTEN est largement associée à une dérégulation des signaux prolifératifs et à des états de différenciation altérés dans divers tissus, ce qui en fait un nœud central dans les études sur le remodelage des voies oncogéniques. Dans les modèles murins, les effets de dosage de *Pten* sont fréquemment utilisés pour étudier les interactions entre voies, notamment avec les récepteurs à activité tyrosine kinase, la signalisation MAPK et les signaux issus du microenvironnement immunitaire.

PTEN Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Pten sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTEN Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Pten dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Pten, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTEN. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Pten natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTEN au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTEN dans les cellules tumorales présentant une expression de Pten silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.