Plasmide Double Nickase (h) PSS1: sc-404364-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PSS1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PSS1 Double Nickase (h) et le plasmide PSS1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PTDSS1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PSS1 Antibody (B-5): sc-515376
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PSS1 | sc-404364-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PSS1 | sc-404364-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTDSS1 code la phosphatidylsérine synthase 1 (PSS1), une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse des réactions d’échange de base permettant de générer de la phosphatidylsérine à partir de la phosphatidylcholine. En contrôlant l’abondance cellulaire de phosphatidylsérine, PSS1 contribue à réguler la biogenèse des membranes, le trafic vésiculaire, l’échange lipidique entre mitochondries et réticulum endoplasmique, ainsi que la signalisation apoptotique liée à l’externalisation de la phosphatidylsérine. L’activité de PTDSS1 s’inscrit au sein de réseaux métaboliques plus larges des phospholipides et des sphingolipides qui façonnent l’identité des organites et la transduction des signaux. Une homéostasie dérégulée de la phosphatidylsérine a été associée à des perturbations de la fonction neuronale et à des pathologies liées aux membranes, ce qui fait de PTDSS1 une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes cellulaires pilotés par les lipides.
PSS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTDSS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTDSS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTDSS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTDSS1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.