Plasmide CRISPR d'Activation (m) PSR: sc-430761-ACT

Le gène murin **Jmjd6** code la protéine **PSR**, une dioxygénase dépendante du 2‑oxoglutarate qui influence le contrôle transcriptionnel et le traitement des ARN via l’hydroxylation de lysines et la déméthylation d’arginines de substrats nucléaires. PSR a été impliquée dans la régulation de l’épissage alternatif et des programmes d’expression génique associés à la chromatine, en interaction avec des voies qui coordonnent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la transcription en réponse au stress. Une activité JMJD6/PSR dérégulée a été associée à une signalisation proliférative aberrante et à une expression altérée de gènes du développement, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer, dans les voies liées à la fibrose et dans la spécification des lignages. Dans les modèles murins, la perturbation de **Jmjd6** est couramment utilisée pour explorer les mécanismes épigénétiques et post‑transcriptionnels qui façonnent l’identité cellulaire.

PSR Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Jmjd6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSR Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Jmjd6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Jmjd6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Jmjd6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSR dans les cellules tumorales présentant une expression de Jmjd6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.