Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSPH: sc-403897-ACT

La phosphosérine phosphatase (PSPH) est une enzyme cytosolique qui catalyse l’étape terminale de la voie de biosynthèse de la sérine phosphorylée, en convertissant la L‑phosphosérine en L‑sérine. En contrôlant la disponibilité de la sérine produite de novo, PSPH influence le métabolisme à un carbone, la synthèse des nucléotides, l’homéostasie redox, ainsi que le métabolisme en aval des lipides et des acides aminés qui soutiennent des programmes cellulaires prolifératifs et d’adaptation au stress. L’activité de PSPH s’articule avec le remodelage métabolique couramment étudié dans les cellules à division rapide et les microenvironnements pauvres en nutriments, où le flux de sérine peut moduler la régulation épigénétique et les réponses au stress oxydant. Une expression dérégulée de PSPH a été étudiée dans des contextes d’altération du métabolisme et du contrôle de la croissance, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de dépendance aux voies métaboliques.

PSPH Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSPH sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSPH Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSPH dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSPH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSPH. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSPH natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSPH au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSPH dans les cellules tumorales présentant une expression de PSPH silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.