Plasmide CRISPR d'Activation (m) PSMD1: sc-427651-ACT

Le gène murin **Psmd1** code la protéine **PSMD1**, une sous-unité centrale non ATPasique de la particule régulatrice 19S du protéasome 26S, qui contribue à la dégradation des protéines dépendante de l’ubiquitine et au maintien de la protéostasie. En favorisant la reconnaissance et le traitement des substrats polyubiquitinylés, PSMD1 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et des issues de signalisation qui dépendent d’un renouvellement protéique régulé, notamment des voies liées à l’activité de **NF-κB** et aux réponses aux dommages de l’ADN. La perturbation de composants régulateurs du protéasome peut remodeler le traitement des antigènes, l’adaptation métabolique et la sensibilité à l’apoptose, faisant de **Psmd1** un nœud utile pour étudier des phénotypes associés à la protéostasie dans des modèles murins cellulaires et tissulaires. Un fonctionnement dérégulé du protéasome est largement associé aux états inflammatoires et à la transformation oncogénique, ce qui fournit un contexte mécanistique pour l’exploration de voies centrées sur PSMD1, sans présumer de retombées thérapeutiques.

PSMD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Psmd1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSMD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Psmd1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Psmd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSMD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Psmd1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSMD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSMD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Psmd1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.