Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSMC2: sc-405022-ACT

PSMC2 code la sous-unité régulatrice 7 (Rpt1) du protéasome 26S, une ATPase AAA+ appartenant à la particule régulatrice 19S, qui fournit l’énergie nécessaire au dépliement des substrats et à leur translocation dans le cœur 20S en vue de leur dégradation protéique dépendante de l’ubiquitine. En contrôlant la protéostasie, PSMC2 influence la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la signalisation du stress et la présentation d’antigènes, en s’intégrant à des voies telles que le renouvellement via le système ubiquitine–protéasome, la régulation de NF-κB et l’adaptation au stress protéotoxique. Des altérations de l’activité du protéasome et de l’expression de ses sous-unités régulatrices sont fréquemment associées à des phénotypes prolifératifs et à une dérégulation du contrôle des points de contrôle observées dans divers contextes pathologiques, faisant de PSMC2 un nœud utile pour étudier le contrôle qualité des protéines et le remodelage des réseaux de régulation. La perturbation des niveaux de PSMC2 peut ainsi aider à analyser comment les fonctions ATP-dépendantes du protéasome façonnent les programmes transcriptionnels et la fitness cellulaire.

PSMC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMC2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSMC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMC2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMC2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSMC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMC2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSMC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSMC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMC2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.