Plasmide CRISPR/Cas9 KO PSM (h): sc-401947

Présentation

FOLH1 code l’antigène membranaire spécifique de la prostate (PSM), une métallopeptidase transmembranaire de type II dotée d’activités folate hydrolase et NAALADase, qui module la disponibilité du glutamate extracellulaire et le métabolisme des folates. PSM participe, de manière dépendante de son activité peptidasique, au traitement des folates polyglutamylés et des neuropeptides, influençant la signalisation des acides aminés et la gestion des nutriments à la surface cellulaire. Chez l’humain, l’expression de FOLH1 est largement utilisée comme marqueur moléculaire en biologie de la prostate et est également détectée dans la néovascularisation associée aux tumeurs, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la signalisation des cellules cancéreuses, des interactions avec le microenvironnement et de la régulation spécifique de lignée. Des altérations de l’activité et de l’expression de PSM ont été associées à des modifications du métabolisme et du trafic médié par les récepteurs liées à des maladies, ce qui soutient des investigations mécanistiques dans des modèles d’oncologie et de neurobiologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PSM (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FOLH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FOLH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FOLH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PSM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FOLH1 pour l'étude de la signalisation de PSM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FOLH1 essentiels à la fonction de PSM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FOLH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PSM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PSM plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FOLH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PSM plasmide HDR (h) et le PSM (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FOLH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FOLH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.