Plasmide Double Nickase (h2) PSK2: sc-418247-NIC-2
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h2) PSK2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PSK2 Double Nickase (h2) et le plasmide PSK2 Double Nickase (h22) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TAOK1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PSK2 Antibody (22): sc-136094
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h2) PSK2 | sc-418247-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La TAOK1 humaine (TAO kinase 1), également appelée PSK2, code une kinase sérine/thréonine qui agit en amont de la signalisation MAPK, en particulier des cascades p38 et JNK activées par le stress, afin de coordonner la dynamique du cytosquelette, l’organisation du centrosome et les processus dépendants des microtubules essentiels à la mitose et au développement neuronal. L’activité de TAOK1 intègre des signaux issus du stress cellulaire et des voies de polarité, modulant des réseaux de phosphorylation qui régulent l’apoptose, la migration et la croissance des neurites. Des études génétiques et fonctionnelles ont mis en cause une dérégulation de TAOK1 dans des phénotypes neurodéveloppementaux et dans un remodelage de la signalisation associé au cancer, ce qui souligne sa pertinence pour des modèles d’altération du contrôle des MAPK et de comportements cellulaires pilotés par le cytosquelette. L’édition génétique de TAOK1 permet d’interroger les mécanismes du dialogue entre voies dépendant des kinases, de cartographier les substrats de phosphorylation et de générer des systèmes de cellules humaines isogéniques afin d’étudier les relations génotype–phénotype dans des contextes pertinents pour la maladie.
PSK2 Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TAOK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TAOK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TAOK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TAOK1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.