Plasmide CRISPR/Cas9 KO Psf3 (h): sc-406717

Présentation

GINS3 code pour Psf3, une sous-unité centrale du complexe GINS hétérotétramérique, qui coopère avec CDC45 et l’hélicase MCM2–7 pour former l’hélicase réplicative CMG, indispensable à l’activation des origines et à une réplication de l’ADN processive. En soutenant la progression de la fourche de réplication et la coordination avec la signalisation du point de contrôle de la phase S, Psf3 contribue au maintien de la stabilité du génome au cours du cycle cellulaire. Une perturbation de l’activité du complexe GINS est associée au stress réplicatif, à une capacité proliférative altérée et à des réponses aux dommages de l’ADN, fréquemment exploitées dans les études de transformation oncogénique. En tant que facteur de réplication dont l’expression est régulée par le cycle cellulaire, GINS3 est largement utilisé comme point d’entrée moléculaire pour étudier la dynamique de la réplication, l’assemblage du replisome associé à la chromatine et les voies qui protègent l’intégrité de l’ADN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Psf3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GINS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GINS3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GINS3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Psf3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GINS3 pour l'étude de la signalisation de Psf3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GINS3 essentiels à la fonction de Psf3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GINS3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Psf3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Psf3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GINS3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Psf3 plasmide HDR (h) et le Psf3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GINS3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GINS3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.