Plasmide CRISPR/Cas9 KO PSF (m): sc-427964

Présentation

Sfpq code le facteur d’épissage PSF (proline- and glutamine-rich splicing factor), une protéine multifonctionnelle régulatrice se liant à l’ARN et à l’ADN, qui coordonne l’épissage des pré-ARNm, le contrôle transcriptionnel et la biologie des paraspeckles nucléaires via des interactions avec des longs ARN non codants tels que NEAT1. Dans les cellules de souris, PSF contribue à la fidélité du traitement des ARN, aux choix d’épissage alternatif et au couplage entre transcription et maturation des ARN, tout en participant à des processus de maintien du génome liés aux réponses aux dommages de l’ADN. Par ces activités, Sfpq influence de vastes programmes d’expression génique affectant le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation neuronale et la signalisation d’adaptation au stress. Une dérégulation de la fonction de SFPQ/PSF et sa mauvaise localisation ont été associées à une altération du métabolisme des ARN et à des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de protéines liant l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PSF (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sfpq dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sfpq, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sfpq à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PSF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sfpq pour l'étude de la signalisation de PSF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sfpq essentiels à la fonction de PSF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sfpq pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PSF plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PSF plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sfpq. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PSF plasmide HDR (m) et le PSF (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sfpq pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sfpq définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.