Plasmide Double Nickase (h) PSD-95: sc-400830-NIC

DLG4 code la PSD-95 (protéine de la densité postsynaptique 95), un échafaudage MAGUK majeur qui organise les synapses excitatrices en regroupant les récepteurs NMDA, les complexes de récepteurs AMPA et les protéines de signalisation associées au niveau de la densité postsynaptique. Grâce à ses domaines PDZ, SH3 et GK, PSD-95 régule la maturation synaptique, le trafic des récepteurs et la plasticité dépendante de l’activité, en couplant la transmission glutamatergique à des voies en aval qui façonnent la structure des épines dendritiques et la signalisation dépendante du calcium. La perturbation des complexes centrés sur PSD-95 est associée à une connectivité synaptique altérée et à une excitabilité des réseaux modifiée, faisant de DLG4 un point d’entrée moléculaire largement utilisé pour étudier les mécanismes des maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques. Dans les modèles neuronaux humains, la fonction de DLG4 est fréquemment étudiée pour disséquer l’assemblage synaptique, l’équilibre excitation/inhibition et la dynamique de signalisation entre récepteurs et échafaudages.

PSD-95 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DLG4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DLG4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DLG4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DLG4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.