Plasmide Double Nickase (h) PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen: sc-400448-NIC

KLK3 code l’antigène spécifique de la prostate (PSA), une sérine protéase sécrétée de la famille des kallikréines, qui contribue au traitement protéolytique des protéines du plasma séminal et à la modulation du réseau extracellulaire de protéases. L’activité PSA/KLK3 s’inscrit dans des cascades de clivage peptidique et des processus de remodelage de la matrice extracellulaire susceptibles d’influencer la différenciation épithéliale et les interactions stroma–épithélium dans le microenvironnement prostatique. L’expression de KLK3 est fortement régulée par la signalisation du récepteur aux androgènes, ce qui la relie à des programmes transcriptionnels hormono-répondants et à la biologie de la lignée prostatique. La dérégulation de l’expression de KLK3 et les altérations de l’activité protéasique sont largement étudiées dans les contextes de pathologies prostatiques, notamment en lien avec des changements associés aux tumeurs touchant la sécrétion, l’état de différenciation et le remodelage du microenvironnement.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KLK3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KLK3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KLK3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KLK3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.