Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen: sc-400448-ACT

KLK3 code l’antigène prostatique spécifique (PSA), une sérine protéase sécrétée de la famille des kallikréines, qui participe au traitement protéolytique des protéines du plasma séminal et à la régulation de cascades de protéases extracellulaires. L’expression de PSA/KLK3 est fortement régulée par la signalisation du récepteur des androgènes et est étroitement liée à la différenciation de l’épithélium prostatique ainsi qu’à l’identité des cellules luminales. En tant qu’élément du remodelage tissulaire et de la protéolyse à proximité de la matrice extracellulaire, l’activité de KLK3 croise des voies impliquées dans la sécrétion, l’équilibre activation/inhibition des protéases et la dynamique du microenvironnement. Une transcription dérégulée de KLK3 est largement utilisée comme lecture moléculaire des programmes dépendants des androgènes et de la physiopathologie prostatique dans les modèles expérimentaux.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KLK3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KLK3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KLK3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KLK3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSA/KLK3/Kallikrein 3/Prostate Specific Antigen dans les cellules tumorales présentant une expression de KLK3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.