PRX2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422788-ACT

Das Mausgen *Prrx2* kodiert PRX2, einen paired-related Homeobox-Transkriptionsfaktor, der Genprogramme reguliert, welche während der Entwicklung die mesenchymale Identität, die Festlegung von Zellschicksalen und die Gewebemusterbildung steuern. PRX2 ist an transkriptionellen Netzwerken beteiligt, die EMT-assoziierte Prozesse (epithelial–mesenchymale Transition), den Umbau der extrazellulären Matrix und das Migrationsverhalten koordinieren, mit nachgeschalteten Effekten auf Differenzierung und wundassoziierte stromale Reaktionen. Eine dysregulierte PRRX2-Aktivität wurde in der Literatur mit veränderter Linienfestlegung und invasiven Phänotypen in krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was PRX2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung transkriptioneller Plastizität macht. Als nukleäres DNA-bindendes Protein wird PRX2 häufig daraufhin untersucht, wie es Entwicklungssignale mit einer vom Chromatinstatus abhängigen transkriptionellen Kontrolle integriert.

PRX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Prrx2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRX2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Prrx2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Prrx2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRX2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Prrx2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRX2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRX2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Prrx2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.