Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX I: sc-418249-ACT

PRDX1 code la peroxyrédoxine I humaine (PRX I), une peroxydase dépendante des thiols qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques afin de maintenir l’homéostasie rédox cellulaire. En tamponnant les espèces réactives de l’oxygène, PRX I influence des réseaux de signalisation sensibles au rédox qui régulent la prolifération, l’apoptose et l’adaptation au stress, notamment des processus liés aux voies MAPK et NF-κB. PRX I contribue aussi au contrôle qualité des protéines via une chimie de relais rédox et peut moduler les réponses inflammatoires en façonnant les signaux oxydatifs. Une dérégulation de l’expression de PRDX1 ou de son état d’oxydation a été associée à des altérations de la gestion du stress oxydant observées en cancérologie, dans les maladies neurodégénératives et les dysfonctions métaboliques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation rédox.

PRX I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX I dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.