PRRG1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416703

Panoramica

PRRG1 (proline rich and Gla domain 1) codifica una proteina transmembrana caratterizzata da un dominio extracellulare dell’acido γ-carbossiglutammico (Gla) e da una regione citoplasmatica ricca di prolina, compatibile con funzioni di interazione proteina–proteina e di impalcatura (scaffold) di segnalazione. Sebbene i suoi ruoli meccanicistici restino definiti solo in parte, PRRG1 è stata collegata alla regolazione della comunicazione cellula–cellula e di reti di segnalazione associate ai recettori che influenzano adesione, organizzazione del citoscheletro e programmi di differenziamento cellulare dipendenti dal contesto. Sono state riportate variazioni di espressione in molteplici contesti biologici, a supporto dell’uso di PRRG1 come bersaglio per studiare il rimodellamento delle vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia. L’analisi funzionale di PRRG1 può aiutare a chiarire come le proteine di membrana con dominio Gla contribuiscano all’integrazione dei segnali e alla stabilità fenotipica nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRRG1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRRG1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRRG1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRRG1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRRG1 per lo studio della segnalazione di PRRG1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRRG1 critici per la funzione di PRRG1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRRG1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRRG1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRRG1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRRG1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRRG1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRRG1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRRG1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.