Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (h): sc-416703

Présentation

PRRG1 (proline-rich and Gla domain 1) code une protéine transmembranaire caractérisée par un domaine extracellulaire d’acide γ‑carboxyglutamique (Gla) et une région cytoplasmique riche en proline, compatible avec des fonctions d’interaction protéine‑protéine et de plateforme de signalisation. Bien que ses rôles mécanistiques restent imparfaitement définis, PRRG1 a été associé à la régulation de la communication intercellulaire et de réseaux de signalisation liés aux récepteurs, qui influencent l’adhésion, l’organisation du cytosquelette et des programmes de différenciation cellulaire dépendants du contexte. Des variations d’expression ont été rapportées dans de multiples contextes biologiques, ce qui étaye l’utilisation de PRRG1 comme cible pour étudier le remodelage des voies de signalisation dans des modèles pertinents pour les maladies. L’étude fonctionnelle de PRRG1 peut aider à préciser comment les protéines membranaires à domaine Gla contribuent à l’intégration des signaux et à la stabilité phénotypique dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRRG1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRRG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRRG1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRRG1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRRG1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRRG1 pour l'étude de la signalisation de PRRG1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRRG1 essentiels à la fonction de PRRG1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRRG1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRRG1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRRG1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRRG1 plasmide HDR (h) et le PRRG1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRRG1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRRG1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.