Particules Lentivirales d'Activation (h2) PRP4 kinase: sc-411224-LAC-2

Le gène humain PRPF4B code la kinase PRP4, une kinase protéique sérine/thréonine qui s’associe au tri-snRNP U4/U6·U5 et régule l’épissage du pré-ARNm en phosphorylant des composants du spliceosome afin de favoriser l’assemblage du spliceosome et son activation catalytique. En contrôlant le choix des sites d’épissage et la maturation des transcrits, la kinase PRP4 relie le traitement nucléaire de l’ARN à la progression du cycle cellulaire et à des programmes de signalisation sensibles au stress qui reposent sur une expression génique coordonnée. Une dérégulation de l’expression ou de l’activité de PRPF4B a été associée à des profils d’épissage aberrants observés dans le cancer et d’autres pathologies impliquant un traitement de l’ARN altéré, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage du transcriptome et de la diversité du protéome. L’édition génétique de PRPF4B dans des cellules humaines permet d’interroger les mécanismes de la dynamique du spliceosome, la phosphorégulation des facteurs d’épissage et les effets en aval sur l’épissage alternatif, les réponses aux dommages de l’ADN et les phénotypes cellulaires dans le cadre de workflows de génomique fonctionnelle.

Les particules d'activation lentivirales PRP4 kinase (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRPF4B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PRP4 kinase (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRPF4B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PRP4 kinase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRPF4B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.