Plasmide CRISPR/Cas9 KO Protein C (h): sc-405598

Présentation

PROC code la protéine C, un zymogène de sérine protéase dépendant de la vitamine K, synthétisé dans le foie et circulant comme régulateur clé de l’hémostase. Après activation à la surface endothéliale par le complexe thrombine–thrombomoduline, la protéine C activée inactive de façon protéolytique les cofacteurs de coagulation Va et VIIIa, limitant ainsi la génération de thrombine. Cette voie anticoagulante est coordonnée avec le récepteur endothélial de la protéine C (EPCR) et la protéine S, reliant le contrôle de la coagulation à l’inflammation vasculaire et à la fonction de barrière. Une expression ou une fonction altérée de PROC est associée à une dérégulation de l’homéostasie de la coagulation et à des phénotypes de maladies thrombotiques, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation de la coagulation et de la biologie endothéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Protein C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PROC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PROC, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PROC à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Protein C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PROC pour l'étude de la signalisation de Protein C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PROC essentiels à la fonction de Protein C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PROC pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Protein C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Protein C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PROC. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Protein C plasmide HDR (h) et le Protein C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PROC pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PROC définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.