Plasmide Double Nickase (m) Prohibitin: sc-422218-NIC

Le gène murin *Phb* code la prohibitine, une protéine d’échafaudage conservée au cours de l’évolution, enrichie dans la membrane interne mitochondriale, où elle forme des complexes de haut poids moléculaire avec PHB2 afin de stabiliser les composants de la chaîne respiratoire et de préserver l’architecture des crêtes mitochondriales. La prohibitine influence la protéostasie mitochondriale, le potentiel de membrane et la mitophagie, en s’intégrant à des voies qui régulent la phosphorylation oxydative, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et le contrôle du cycle cellulaire. Par ces fonctions, PHB intervient dans l’adaptation métabolique et les réponses au stress, fréquemment perturbées dans la neurodégénérescence, les dysfonctions cardiométaboliques et la biologie des cancers. *Phb* constitue donc un point d’entrée largement utilisé pour étudier le contrôle qualité mitochondrial et le dialogue entre la fonction des organites et les programmes transcriptionnels nucléaires.

Prohibitin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Phb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Phb. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Phb. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Phb.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.