Plásmido Doble Nickase (h) Progesterone Receptor: sc-400198-NIC

PGR codifica el receptor humano de progesterona, un factor de transcripción nuclear activado por ligando que regula programas génicos que controlan el desarrollo de los tejidos reproductivos, la decidualización y la proliferación y diferenciación de células sensibles a señales endocrinas. Tras la unión de la progesterona, PGR se une a elementos de respuesta hormonal y a corre­guladores para modular la cromatina y la transcripción, y además se integra con las vías MAPK/ERK y PI3K/AKT, así como con la señalización del receptor de estrógeno (crosstalk), para moldear respuestas del ciclo celular e inflamatorias. La alteración de la expresión de PGR, del equilibrio de isoformas o de su salida de señalización se asocia con biología dependiente de hormonas y se estudia con frecuencia en contextos como el cáncer de mama y de endometrio, la endometriosis, los fibromas uterinos y la infertilidad. Estas características hacen de PGR un nodo central para investigar redes transcripcionales de receptores esteroideos y la regulación endocrina en modelos celulares humanos.

Progesterone Receptor El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PGR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PGR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PGR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PGR alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.