Plasmide CRISPR d'Activation (h) Profilin-2: sc-403456-ACT

PFN2 code la profiline‑2, une protéine se liant aux monomères d’actine qui régule la dynamique de polymérisation de l’actine et relie le remodelage du cytosquelette au trafic membranaire et à la transduction du signal. La profiline‑2 coordonne des interactions avec des ligands contenant des motifs poly‑L‑proline et avec des phosphoinositides, soutenant des processus tels que l’extension des neurites, la fonction synaptique, la motilité cellulaire et l’endocytose. Par son rôle dans l’organisation du cytosquelette d’actine, PFN2 influence des voies qui gouvernent l’adhésion, la migration et la connectivité neuronale. La dérégulation du remodelage de l’actine dépendant de la profiline‑2 a été étudiée dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que de comportements cellulaires invasifs.

Profilin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PFN2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Profilin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PFN2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PFN2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Profilin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PFN2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Profilin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Profilin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PFN2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.