Particules Lentivirales d'Activation (h) PRODH: sc-403063-LAC

Le gène humain **PRODH** code la proline déshydrogénase (proline oxydase), une flavoprotéine de la membrane interne mitochondriale qui catalyse la première étape du catabolisme de la proline, en convertissant la proline en **Δ1‑pyrroline‑5‑carboxylate** et en transférant des électrons à la chaîne respiratoire. Via la navette rédox proline–P5C, PRODH relie le métabolisme des acides aminés à l’équilibre rédox cellulaire, à la fonction mitochondriale et à l’homéostasie bioénergétique. Des altérations de l’activité de PRODH ont été associées à des perturbations de la signalisation du stress oxydatif et à une reprogrammation métabolique, avec des implications pour des phénotypes neuropsychiatriques et des programmes métaboliques liés au cancer. En tant que nœud de voie reliant le métabolisme de la proline, la production d’ERO (ROS) et la respiration mitochondriale, PRODH est fréquemment étudié dans des travaux portant sur l’adaptation au stress et la régulation métabolique.

Les particules d'activation lentivirales PRODH (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRODH dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PRODH (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRODH, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PRODH. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRODH ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.