Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT8 (h): sc-404371

Présentation

PRMT8 (protéine arginine méthyltransférase 8) est une PRMT de type I associée à la membrane qui catalyse la diméthylation asymétrique de résidus d’arginine sur des substrats protéiques, modulant les interactions protéine–protéine, la localisation subcellulaire et l’intensité des signaux. Elle contribue à la régulation de réseaux de modifications post-traductionnelles en interface avec la dynamique du cytosquelette, le trafic vésiculaire et des voies de transduction du signal façonnées par la méthylation de l’arginine. L’activité de PRMT8 est liée au contrôle de processus neuronaux et synaptiques, et des programmes de méthylation de la famille PRMT altérés sont fréquemment étudiés dans des contextes de neurobiologie, de différenciation cellulaire et de signalisation oncogénique. La dérégulation de la méthylation de l’arginine et le remodelage des substrats associés aux PRMT sont également étudiés pour leur rôle dans les réponses au stress et les modifications de la protéostase observées dans divers modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRMT8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRMT8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRMT8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRMT8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRMT8 pour l'étude de la signalisation de PRMT8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRMT8 essentiels à la fonction de PRMT8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRMT8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRMT8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRMT8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRMT8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRMT8 plasmide HDR (h) et le PRMT8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRMT8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRMT8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.