Particules Lentivirales d'Activation (h) PRMT5: sc-401115-LAC

PRMT5 code la protéine arginine méthyltransférase 5, une méthyltransférase majeure de type II qui catalyse la diméthylation symétrique de résidus d’arginine sur les histones ainsi que sur de nombreux substrats non histones. En régulant l’accessibilité de la chromatine, les programmes transcriptionnels et l’épissage de l’ARN, PRMT5 influence des processus fondamentaux tels que la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN, la biogenèse des ribosomes et l’expression de gènes associés à l’état de stemness. L’activité de PRMT5 s’inscrit à l’interface de réseaux épigénétiques et de signalisation, notamment la transcription pilotée par MYC, la modulation de la voie p53 et l’assemblage du spliceosome via la méthylation des protéines Sm. Une expression ou une fonction dérégulée de PRMT5 a été associée à des altérations de la prolifération, de la spécification de lignée et de la transformation oncogénique dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour étudier le contrôle épigénétique de phénotypes liés aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales PRMT5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRMT5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PRMT5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRMT5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PRMT5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRMT5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.