Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT3 (h): sc-406688

Présentation

PRMT3 code une méthyltransférase de type I des arginines protéiques, qui catalyse la diméthylation asymétrique de résidus arginine sur des substrats protéiques, contribuant au contrôle post‑traductionnel des interactions protéiques et du métabolisme de l’ARN. PRMT3 est principalement cytoplasmique et a été associée à la régulation de la biogenèse des ribosomes et de la traduction, notamment via la méthylation de protéines ribosomiques, influençant ainsi la protéostasie et les programmes de croissance cellulaire. Par des interactions croisées avec des voies de signalisation et de réponse au stress, l’activité de PRMT3 peut moduler indirectement les profils d’expression génique via le contrôle de la traduction et l’assemblage de complexes ribonucléoprotéiques. Une méthylation des arginines dérégulée et une activité altérée de la famille PRMT sont fréquemment associées à des phénotypes liés au cancer et à d’autres troubles impliquant un traitement anormal de l’ARN et une synthèse protéique perturbée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRMT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRMT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRMT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRMT3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRMT3 pour l'étude de la signalisation de PRMT3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRMT3 essentiels à la fonction de PRMT3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRMT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRMT3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRMT3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRMT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRMT3 plasmide HDR (h) et le PRMT3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRMT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRMT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.