PRL-3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402331-ACT

PTP4A3 codiert PRL-3, eine prenylierte Protein-Tyrosin-Phosphatase, die an intrazellulären Membranen lokalisiert und phosphorylierungsabhängige Signalnetzwerke moduliert, welche Zellmigration, Umbau des Zytoskeletts und Proliferation steuern. PRL-3 wird mit der Regulation von Signalwegen wie PI3K/AKT, MAPK/ERK und der Signalübertragung durch Rho-Familien-GTPasen in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch Adhäsionsdynamiken und invasive Phänotypen. Eine dysregulierte Expression von PTP4A3/PRL-3 wird häufig im Kontext von Tumorprogression und Metastasierungsbiologie untersucht, wo sie mit veränderten Überlebens- und Motilitätsprogrammen korreliert. Als Zielgen beim Menschen wird PTP4A3 eingesetzt, um eine durch Phosphatasen getriebene Umverdrahtung von Signalkreisläufen und transkriptionellen Zuständen zu untersuchen, die für onkogene Transformation und Anpassung an das Mikromilieu relevant sind.

PRL-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PTP4A3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRL-3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PTP4A3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PTP4A3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRL-3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PTP4A3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRL-3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRL-3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PTP4A3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.