Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRIM2A (m): sc-422397

Présentation

Prim2 code PRIM2A, la grande sous-unité catalytique de la primase ADN au sein du complexe Pol α–primase, qui synthétise les amorces ARN–ADN nécessaires pour initier la réplication de l’ADN sur les brins directeur et retardé. PRIM2A favorise l’activation des origines de réplication, l’amorçage des fragments d’Okazaki et, plus globalement, la progression de la phase S ; sa fonction est étroitement intégrée à l’assemblage du replisome et au relais entre polymérases. Une altération de l’activité de la primase devrait accroître le stress réplicatif, compromettre la stabilité des fourches et augmenter la dépendance aux voies de réponse aux dommages de l’ADN et de checkpoints. En tant que facteur central de la réplication, PRIM2A est largement pertinent pour les études sur le maintien du génome, le contrôle de la prolifération cellulaire et les mécanismes reliant les défauts de réplication aux pathologies associées à l’instabilité génomique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRIM2A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prim2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prim2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prim2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRIM2A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prim2 pour l'étude de la signalisation de PRIM2A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prim2 essentiels à la fonction de PRIM2A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prim2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRIM2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRIM2A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prim2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRIM2A plasmide HDR (m) et le PRIM2A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prim2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prim2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.