Plasmide CRISPR d'Activation (h) Presenilin 1: sc-401227-ACT

PSEN1 code la préséniline 1, cœur catalytique du complexe γ‑sécrétase, qui assure la protéolyse intramembranaire de nombreuses protéines membranaires de type I, notamment les récepteurs NOTCH et la protéine précurseur de l’amyloïde (APP). Par des événements de clivage régulés, la préséniline 1 influence la signalisation Notch, les décisions de destin cellulaire et le trafic des protéines au sein des compartiments endosomaux et lysosomaux. L’activité de PSEN1 affecte également l’homéostasie du calcium et la fonction synaptique via une modulation, dépendante du processing, des voies de signalisation neuronales. Les variations génétiques et le dérèglement de la fonction de la γ‑sécrétase sont fortement associés à des mécanismes neurodégénératifs pertinents pour la biologie de la maladie d’Alzheimer, notamment une production modifiée de peptides Aβ et des réponses de stress cellulaire en aval.

Presenilin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSEN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Presenilin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSEN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSEN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Presenilin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSEN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Presenilin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Presenilin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSEN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.