Plasmide CRISPR/Cas9 KO Prealbumin (h): sc-401083

Présentation

Le gène humain **TTR** code la **préalbumine** (transthyrétine), une protéine porteuse tétramérique sécrétée qui transporte la **thyroxine (T4)** et le **rétinol** en se liant à la **protéine de liaison au rétinol**, contribuant ainsi à la distribution des hormones endocrines et à l’homéostasie de la vitamine A. La préalbumine est synthétisée principalement par les hépatocytes et est également exprimée dans le plexus choroïde, où elle participe au transport des protéines et des hormones entre les compartiments du plasma et du liquide céphalo-rachidien. Sa biologie recoupe la protéostasie de la voie sécrétoire, le renouvellement extracellulaire des protéines et les dynamiques de liaison aux ligands qui influencent la signalisation métabolique systémique. Un repliement et une agrégation dérégulés de la TTR sont associés à des maladies de dépôts amyloïdes, tandis que des modifications de son expression ou de sa stabilité peuvent éclairer des études sur la fonction hépatique, la prise en charge des hormones thyroïdiennes et les mécanismes de mauvais repliement protéique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Prealbumin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TTR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TTR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TTR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Prealbumin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TTR pour l'étude de la signalisation de Prealbumin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TTR essentiels à la fonction de Prealbumin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TTR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Prealbumin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Prealbumin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TTR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Prealbumin plasmide HDR (h) et le Prealbumin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TTR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TTR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.