Particules Lentivirales d'Activation (m) Pre-TCRα: sc-422473-LAC

Ptcra code l’alpha du récepteur pré‑T des cellules T chez la souris (pré‑TCRα), un composant essentiel du complexe pré‑TCR qui s’associe à la chaîne TCRβ pour orienter le développement précoce des thymocytes. La signalisation via le pré‑TCRα favorise la survie et la prolifération au point de contrôle de la β‑sélection, soutenant la transition des thymocytes double négatifs vers double positifs et coordonnant l’exclusion allélique lors du réarrangement de TCRβ. Cette voie s’intègre à la machinerie de signalisation proximale du TCR, notamment LCK/ZAP70, ainsi qu’aux programmes MAPK et NF‑κB en aval, afin de façonner l’engagement de lignée et la formation du répertoire. Une signalisation associée à PTCRA dérégulée est pertinente pour l’étude d’une sélection thymocytaire aberrante, de phénotypes d’immunodéficience et des mécanismes de leucémogenèse de la lignée T dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales Pre-TCRα (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ptcra dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Pre-TCRα (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ptcra, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Pre-TCRα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ptcra ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.