Plásmido Doble Nickase (h) PRDM9: sc-412740-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PRDM9 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PRDM9 (h) y el plásmido de doble nickasa PRDM9 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRDM9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PRDM9 | sc-412740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PRDM9 | sc-412740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM9 codifica una metiltransferasa de lisina de histonas específica de la meiosis y un factor de unión al ADN que determina la localización de los puntos calientes de recombinación al reconocer motivos de secuencia y depositar las marcas H3K4me3 y H3K36me3. A través de sus dominios KRAB, PR/SET y de dedos de zinc, PRDM9 coordina la remodelación de la cromatina y el reclutamiento de la maquinaria de recombinación meiótica para iniciar la formación programada de roturas de doble cadena y el correcto apareamiento de los cromosomas homólogos. La variación en los arreglos de dedos de zinc de PRDM9 es un determinante principal del uso de puntos calientes y de la distribución de entrecruzamientos, lo que vincula la función de PRDM9 con la estabilidad del genoma y la biología reproductiva. La actividad desregulada de PRDM9 o su expresión ectópica también se ha estudiado en el contexto de patrones epigenéticos anómalos y reordenamientos genómicos, lo que la hace relevante para investigaciones sobre procesos mutacionales e integridad de la línea germinal.
PRDM9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRDM9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRDM9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRDM9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRDM9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.