Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRDM8 (h): sc-406359

Présentation

PRDM8 (PR/SET domain 8) code un régulateur transcriptionnel contenant un domaine PR/SET, qui influence l’état de la chromatine et les programmes d’expression génique au cours du développement. En tant que membre de la famille PRDM, PRDM8 est associé à des mécanismes de contrôle épigénétique qui façonnent la différenciation neuronale, le guidage axonal et, plus largement, des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. Une régulation altérée des voies associées à PRDM8 peut perturber les décisions de destin cellulaire et a été étudiée dans le contexte de dysfonctionnements neurodéveloppementaux et de la dérégulation transcriptionnelle observée dans des paysages épigénétiques pertinents pour le cancer. L’étude de PRDM8 permet une dissection mécanistique de la répression/activation médiée par la chromatine, du contrôle enhancer–promoteur et des effets en aval sur la prolifération et la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRDM8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRDM8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRDM8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRDM8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRDM8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRDM8 pour l'étude de la signalisation de PRDM8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRDM8 essentiels à la fonction de PRDM8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRDM8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRDM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRDM8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRDM8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRDM8 plasmide HDR (h) et le PRDM8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRDM8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRDM8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.