Plasmide Double Nickase (h) PRDM14: sc-404426-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PRDM14 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PRDM14 Double Nickase (h) et le plasmide PRDM14 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRDM14. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PRDM14 Antibody (F-10): sc-518186
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PRDM14 | sc-404426-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PRDM14 | sc-404426-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM14 code un régulateur transcriptionnel contenant un domaine PR/SET, qui contribue à établir et à maintenir les programmes de pluripotence ainsi que la compétence des cellules germinales grâce à un contrôle épigénétique et transcriptionnel. Dans les cellules humaines, PRDM14 module l’état de la chromatine et les paysages de méthylation de l’ADN, influençant l’engagement de lignée, l’efficacité de la reprogrammation et les réseaux de régulation génique du développement. Une expression aberrante de PRDM14 et un dérèglement des circuits de pluripotence ont été associés à des états de différenciation altérés et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans divers contextes tumoraux. En tant que nœud des voies associées à la « stemness », PRDM14 est fréquemment étudié afin d’élucider les mécanismes de régulation épigénétique, les décisions de destin cellulaire et la stabilité des réseaux de facteurs de transcription.
PRDM14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRDM14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRDM14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRDM14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRDM14.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.