Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRDM14: sc-404426-ACT

PRDM14 (protéine 14 à doigt de zinc du domaine PR) est un régulateur transcriptionnel spécifique de séquence qui contribue à contrôler les programmes de pluripotence, la reprogrammation épigénétique et l’expression de gènes associés aux cellules germinales dans les cellules humaines. Il influence l’état de la chromatine en modulant les marques d’histones et la dynamique de la méthylation de l’ADN, en coordonnant des réseaux transcriptionnels qui gouvernent les décisions de destinée cellulaire et la différenciation. L’activité de PRDM14 recoupe des voies qui maintiennent des états transcriptionnels de type « cellule souche » et régulent l’engagement de lignée, ce qui en fait une cible pertinente pour les études en biologie du développement et en reprogrammation cellulaire. Une expression dérégulée de PRDM14 a été associée à une altération des circuits transcriptionnels et à des déséquilibres épigénétiques observés dans de multiples contextes cancéreux, ce qui soutient son étude en tant que nœud de programmes oncogéniques liés au phénotype « stemness ».

PRDM14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDM14 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRDM14 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDM14 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDM14, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRDM14. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDM14 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRDM14 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRDM14 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDM14 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.