Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PRC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401679-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PRC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PRC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PRC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PRC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PRC1: sc-376983
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PRC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401679-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401679-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRC1 (protein regulator of cytokinesis 1) ist ein konserviertes mikrotubuliassoziiertes Protein, das antiparallele Mikrotubuli in der Spindelmittelzone quervernetzt und für den Aufbau der zentralen Spindel, die Positionierung der Teilungsfurche und den Abschluss der Zytokinese essenziell ist. Seine Aktivität ist mit mitotischen Kinasen und Motorproteinen koordiniert, um eine zuverlässige Chromosomensegregation und Abtrennung (Abszission) sicherzustellen, wodurch PRC1 mit zentralen Signalwegen des Zellzyklus und der mitotischen Spindel verknüpft ist. Eine Fehlregulation der PRC1-Expression oder -Funktion kann die Genauigkeit der Zellteilung und die Genomstabilität stören—Merkmale, die häufig im Kontext proliferativer Erkrankungen und der Tumorbiologie untersucht werden. PRC1 wird daher breit als molekularer Einstiegspunkt genutzt, um mitotische Progression, Spindelarchitektur und die Kontrolle von Zytokinese-Checkpoints in menschlichen Zellen zu untersuchen.
PRC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PRC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PRC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PRC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PRC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.