Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAT4A (h): sc-404775

Présentation

CNPY3 code PRAT4A, un co‑chaperon résident du réticulum endoplasmique qui soutient la maturation et le contrôle qualité des récepteurs de type Toll (TLR) et d’autres récepteurs apparentés de l’immunité innée. PRAT4A participe à des processus précoces de la voie sécrétoire qui régissent le repliement des récepteurs, leur glycosylation et leur trafic vers les endosomes ou la membrane plasmique, influençant ainsi les signalisations inflammatoires pilotées par NF‑κB et les IRF. Une altération de la fonction de PRAT4A peut perturber la réactivité des récepteurs de reconnaissance de motifs et les programmes de cytokines, reliant la biologie de CNPY3 aux études sur l’infection, l’inflammation et la dysrégulation immunitaire. Son rôle dans la biogenèse des récepteurs la rend également pertinente pour disséquer les réseaux de protéostasie du RE et des états de signalisation innée spécifiques de certains types cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAT4A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CNPY3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CNPY3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CNPY3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRAT4A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CNPY3 pour l'étude de la signalisation de PRAT4A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CNPY3 essentiels à la fonction de PRAT4A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CNPY3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRAT4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRAT4A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CNPY3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRAT4A plasmide HDR (h) et le PRAT4A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CNPY3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CNPY3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.