Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAP1 (m): sc-423619

Présentation

La protéine acide riche en proline 1 (PRAP1), codée chez la souris par le gène *Prap1*, est un facteur associé aux épithéliums, particulièrement abondant dans les tissus gastro-intestinaux et lié aux réponses cellulaires au stress luminal. L’expression de PRAP1 est régulée par des signaux inflammatoires et des facteurs de croissance, notamment via des voies en aval de STAT et des réseaux de récepteurs nucléaires qui modulent la fonction de barrière de la muqueuse. Parmi les rôles décrits figurent la modulation de la survie, de la différenciation et des programmes de régénération épithéliale lors des phases de lésion tissulaire et de réparation. Une dérégulation de PRAP1 a été associée à une homéostasie intestinale altérée et à des contextes pathologiques liés à l’inflammation, ce qui en fait un outil utile pour étudier les mécanismes reliant l’adaptation de l’épithélium au stress à l’intégrité de la barrière.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prap1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prap1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prap1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRAP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prap1 pour l'étude de la signalisation de PRAP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prap1 essentiels à la fonction de PRAP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prap1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRAP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRAP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prap1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRAP1 plasmide HDR (m) et le PRAP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prap1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prap1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.