Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAMEF6 (h): sc-417298

Présentation

PRAMEF6 (preferentially expressed antigen in melanoma family member 6) est une protéine de la famille PRAME, spécifique des primates, dont l’expression est très restreinte dans les tissus normaux et fréquemment déréprimée dans les cancers, ce qui est conforme à la biologie des antigènes cancer/testis. Bien que PRAMEF6 soit moins bien caractérisée sur le plan fonctionnel que PRAME, les protéines de la famille PRAME sont impliquées dans la régulation transcriptionnelle et épigénétique et ont été associées à la modulation de la signalisation du récepteur de l’acide rétinoïque ainsi qu’aux programmes de différenciation cellulaire. Une expression altérée des gènes de la famille PRAME est liée à la prolifération des cellules tumorales, à la reconnaissance immunitaire et à l’identité de lignée, faisant de PRAMEF6 un marqueur utile et une cible mécanistique pour l’étude des états transcriptionnels oncogéniques. Parmi les applications de recherche figurent le profilage des réseaux d’expression génique dépendants de PRAMEF6 et l’étude des mécanismes régulateurs permettant son activation aberrante en contexte malin.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAMEF6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRAMEF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRAMEF6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRAMEF6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRAMEF6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRAMEF6 pour l'étude de la signalisation de PRAMEF6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRAMEF6 essentiels à la fonction de PRAMEF6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRAMEF6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRAMEF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRAMEF6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRAMEF6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRAMEF6 plasmide HDR (h) et le PRAMEF6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRAMEF6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRAMEF6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.