Plasmide CRISPR/Cas9 KO PPP1R6 (h): sc-406901

Présentation

PPP1R3D code la sous-unité régulatrice PPP1R6, un adaptateur ciblant le glycogène qui oriente la protéine phosphatase 1 (PP1) vers des substrats impliqués dans le stockage des glucides et l’homéostasie énergétique. En modulant la localisation de PP1 et son accès catalytique, PPP1R6 peut influencer l’état de phosphorylation des enzymes du métabolisme du glycogène et, par conséquent, façonner la synthèse et la mobilisation du glycogène dans les cellules humaines. Ce nœud de régulation s’inscrit à l’interface de réseaux de signalisation de détection des nutriments et de kinases/phosphatases qui coordonnent les flux métaboliques, les conditions de croissance cellulaire et les réponses au stress. Une gestion dérégulée du glycogène et une signalisation phosphatase altérée sont des caractéristiques récurrentes de pathologies métaboliques et prolifératives, faisant de PPP1R6 un point d’entrée utile pour des études mécanistiques de la phosphorégulation dans des contextes pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PPP1R6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPP1R3D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPP1R3D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPP1R3D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PPP1R6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPP1R3D pour l'étude de la signalisation de PPP1R6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PPP1R3D essentiels à la fonction de PPP1R6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPP1R3D pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PPP1R6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PPP1R6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPP1R3D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PPP1R6 plasmide HDR (h) et le PPP1R6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPP1R3D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPP1R3D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.