Plasmide CRISPR d'Activation (h) PPP1R26: sc-411368-ACT

PPP1R26 code une protéine régulatrice qui s’associe aux complexes de la protéine phosphatase 1 (PP1), contribuant à orienter l’activité de la phosphatase vers des substrats spécifiques et des compartiments subcellulaires distincts. En modulant la déphosphorylation des résidus sérine/thréonine, PPP1R26 est susceptible d’influencer des programmes dépendants de la phosphorylation, notamment la progression du cycle cellulaire, des processus associés à la chromatine et le contrôle transcriptionnel. La perturbation des réseaux régulateurs de PP1 peut remodeler la fidélité de la signalisation et la protéostasie, ce qui rend PPP1R26 pertinent pour l’étude de dérégulations de la phosphorégulation observées dans divers contextes pathologiques. Son expression et la dynamique de ses interactions constituent un levier utile pour analyser comment le ciblage de PP1 contribue aux transitions d’état cellulaire.

PPP1R26 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPP1R26 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PPP1R26 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPP1R26 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPP1R26, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PPP1R26. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPP1R26 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PPP1R26 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PPP1R26 dans les cellules tumorales présentant une expression de PPP1R26 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.