Plasmide CRISPR/Cas9 KO PPM1H (h): sc-412800

Présentation

PPM1H code la protéine phosphatase 1H dépendante de Mg2+/Mn2+, une phosphatase sérine/thréonine de la famille PP2C qui contrebalance la signalisation des kinases en déphosphorylant des protéines cibles impliquées dans l’homéostasie cellulaire. En régulant des voies dépendantes de la phosphorylation, PPM1H a été associée au contrôle de la prolifération cellulaire, des réponses au stress et de la protéostasie, notamment des processus qui influencent le trafic endosomal et le renouvellement des protéines. Une expression ou une activité altérée de PPM1H peut modifier la dynamique des réseaux de signalisation, et a été étudiée dans le contexte du remodelage de la signalisation phospho-dépendante associé au cancer, ainsi que d’autres troubles où l’équilibre phosphatase–kinase est perturbé. Par conséquent, PPM1H constitue un nœud utile pour des études mécanistiques portant sur des phénotypes pilotés par la phosphorylation et sur les interactions entre voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PPM1H (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PPM1H dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PPM1H, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PPM1H à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PPM1H.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PPM1H pour l'étude de la signalisation de PPM1H, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PPM1H essentiels à la fonction de PPM1H
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PPM1H pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PPM1H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PPM1H plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PPM1H. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PPM1H plasmide HDR (h) et le PPM1H (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PPM1H pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PPM1H définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.