Plasmide Double Nickase (m) PPARγ: sc-422363-NIC

Pparg code le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes gamma (PPARγ), un facteur de transcription nucléaire activé par un ligand qui régule des programmes géniques contrôlant la différenciation des adipocytes, le stockage des lipides, l’homéostasie du glucose et la signalisation anti-inflammatoire. PPARγ forme des hétérodimères avec RXR et se lie à des éléments de réponse PPAR afin de coordonner des réseaux transcriptionnels dans le tissu adipeux, les macrophages et d’autres types cellulaires métaboliques. Son activité interagit avec la signalisation de l’insuline, le métabolisme des acides gras et des voies dépendantes des cytokines qui façonnent l’équilibre énergétique et les phénotypes immunitaires. Une signalisation PPARγ dérégulée est fréquemment étudiée, à l’aide de modèles murins, dans le contexte de l’obésité, de la résistance à l’insuline, de la biologie du foie gras, de l’athérosclérose et des troubles inflammatoires.

PPARγ Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Pparg dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Pparg. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Pparg. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Pparg.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.