Particules Lentivirales d'Activation (h) PP2Cα: sc-403960-LAC

PPM1A code la protéine phosphatase 2C alpha (PP2Cα), une phosphatase sérine/thréonine dépendante du Mg2+/Mn2+ qui agit comme régulateur négatif de la signalisation du stress cellulaire. PP2Cα déphosphoryle des composants clés des voies MAPK, notamment les modules p38 et JNK, et module les interactions (cross-talk) avec NF-κB, le contrôle du cycle cellulaire et les programmes d’apoptose. Par ces fonctions, PPM1A contribue à ajuster les réponses au stress inflammatoire et génotoxique, la différenciation et la reprise des points de contrôle. Une activité ou une expression dérégulée de PPM1A a été associée à une altération de l’homéostasie des voies de signalisation dans la biologie des cancers, à des phénotypes de stress métabolique et à des pathologies liées au système immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales PP2Cα (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PPM1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PP2Cα (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PPM1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PP2Cα. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PPM1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.