PP2Cα Lentiviral Activation Particles (h): sc-403960-LAC

PPM1A kodiert die Proteinphosphatase 2C alpha (PP2Cα), eine Mg2+/Mn2+-abhängige Serin/Threonin-Phosphatase, die als negativer Regulator zellulärer Stresssignalwege wirkt. PP2Cα dephosphoryliert zentrale Komponenten der MAPK-Signalwege, darunter die p38- und JNK-Module, und moduliert das Crosstalk mit NF-κB, der Zellzykluskontrolle und Apoptoseprogrammen. Über diese Funktionen trägt PPM1A dazu bei, Entzündungs- und genotoxische Stressantworten, Differenzierung sowie die Erholung von Checkpoints fein abzustimmen. Eine fehlregulierte PPM1A-Aktivität oder -Expression wurde mit einer veränderten Signalweg-Homöostase in der Krebsbiologie, metabolischen Stressphänotypen und immunassoziierten Pathologien in Verbindung gebracht.

PP2Cα Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PPM1A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PP2Cα Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PPM1A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PP2Cα-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PPM1A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.