Plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-B1 (m): sc-422386

Présentation

Ppp3r1 code la sous-unité régulatrice B1 de la PP2B (calcineurine B1), un partenaire essentiel de liaison au Ca2+ qui stabilise et module l’activité phosphatase de la calcineurine. Via une signalisation dépendante du Ca2+/calmoduline, la calcineurine contrôle la déphosphorylation de substrats tels que les facteurs de transcription NFAT, reliant les flux calciques à des programmes transcriptionnels qui gouvernent l’activation immunitaire, la plasticité neuronale et le remodelage musculaire. Dans des modèles murins, la signalisation dépendante de PPP3R1 interagit avec des voies régulant les réponses du récepteur des lymphocytes T, la fonction synaptique et le remodelage associé à l’hypertrophie cardiaque, ce qui la rend pertinente pour des études sur l’inflammation, la neurobiologie et la signalisation adaptative au stress. Une activité de la calcineurine dérégulée est largement impliquée dans le remodelage pathologique et le dysfonctionnement immunitaire, faisant de PP2B-B1 un nœud mécanistique pour la dissection de voies dans des systèmes pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-B1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp3r1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp3r1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp3r1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PP2B-B1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp3r1 pour l'étude de la signalisation de PP2B-B1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp3r1 essentiels à la fonction de PP2B-B1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp3r1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PP2B-B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PP2B-B1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp3r1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PP2B-B1 plasmide HDR (m) et le PP2B-B1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp3r1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp3r1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.