PP2B-B1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422386

Descripción general

Ppp3r1 codifica la subunidad reguladora B1 de la PP2B (calcineurina B1), un socio esencial de unión a Ca2+ que estabiliza y modula la actividad fosfatasa de la calcineurina. A través de la señalización dependiente de Ca2+/calmodulina, la calcineurina controla la desfosforilación de sustratos como los factores de transcripción NFAT, conectando los flujos de calcio con programas transcripcionales que regulan la activación inmunitaria, la plasticidad neuronal y la remodelación muscular. En modelos murinos, la señalización dependiente de PPP3R1 converge con vías que regulan las respuestas del receptor de células T, la función sináptica y la remodelación asociada a la hipertrofia cardíaca, lo que la hace relevante para estudios de inflamación, neurobiología y señalización adaptativa al estrés. La actividad desregulada de la calcineurina se ha implicado ampliamente en la remodelación patológica y la disfunción inmunitaria, situando a PP2B-B1 como un nodo mecanístico para desentrañar vías en sistemas relevantes para enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP2B-B1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ppp3r1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ppp3r1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ppp3r1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP2B-B1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ppp3r1 para la investigación de la señalización de PP2B-B1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ppp3r1 críticos para la función de PP2B-B1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ppp3r1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ppp3r1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP2B-B1 (m) y el plásmido HDR PP2B-B1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ppp3r1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ppp3r1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.