Plasmide Double Nickase (h) PP1γ: sc-401476-NIC

PPP1CC code pour la sous-unité catalytique de la protéine phosphatase 1 gamma (PP1γ), une phosphatase majeure des sérines/thréonines qui contrebalance la signalisation des kinases en déphosphorylant de nombreux substrats dans le noyau et le cytoplasme. L’activité de PP1γ est orientée par des sous-unités régulatrices afin de contrôler la progression du cycle cellulaire, la sortie de mitose, les réponses aux dommages de l’ADN, le métabolisme du glycogène et la dynamique du cytosquelette. Par ces voies, PPP1CC contribue à ajuster des processus dépendants de la phosphorylation tels que l’organisation de la chromatine, la régulation transcriptionnelle et la fonction des centrosomes/fuseau mitotique. Une signalisation PP1 dérégulée ainsi qu’une expression ou une localisation altérée de PPP1CC ont été associées à des phénotypes de prolifération et de réponse au stress pertinents pour la biologie du cancer, la neurobiologie et la régulation métabolique.

PP1γ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPP1CC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPP1CC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPP1CC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPP1CC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.