PP1γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401476

概要

PPP1CCは、プロテインホスファターゼ1γ（PP1γ）をコードしており、これは触媒活性をもつセリン／スレオニン脱リン酸化酵素である。PP1γは多様な調節サブユニットと複合体を形成し、主要な基質の脱リン酸化を担うとともに、基質特異性や細胞内局在の制御に関与する。PP1γは、有糸分裂の進行、染色体分配、細胞骨格ダイナミクスに関わるリン酸化状態を調節することで、主要なシグナル伝達および細胞周期制御ネットワークに寄与し、さらにRNAプロセシングや細胞ストレス応答への関与も示唆されている。これらの役割を通じて、PP1γは増殖、分化、ゲノム安定性を司る経路に影響を与えるため、PPP1CCはリン酸化駆動型の制御回路を研究するうえで重要なノードとなる。PP1活性の破綻は、がん原性シグナル伝達、神経生物学関連の機構、その他のリン酸化依存性疾患プロセスと関連付けられており、ヒト細胞モデルにおける機構的検証研究を後押しする。

PP1γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPP1CC遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPP1CC内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPP1CCのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP1γタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP1γシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPP1CC欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP1γの機能に不可欠なPPP1CCエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPP1CCゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP1γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPP1γ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPP1CC遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP1γ HDRプラスミド（h）および PP1γ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPP1CCホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPP1CC標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。