Plasmide CRISPR d'Activation (h) PP1γ: sc-401476-ACT

PPP1CC code la protéine phosphatase 1 gamma (PP1γ), une phosphatase catalytique sérine/thréonine qui s’associe à diverses sous-unités régulatrices afin de contrôler la spécificité des substrats et la localisation subcellulaire. PP1γ participe à des voies essentielles dépendantes de la phosphorylation qui régissent la progression du cycle cellulaire, la sortie de mitose, les réponses aux dommages de l’ADN, l’organisation du cytosquelette et le métabolisme de l’ARN, via la déphosphorylation de protéines clés de signalisation et de structure. En modulant l’équilibre kinase–phosphatase, PPP1CC influence la dynamique de la chromatine et les programmes transcriptionnels qui façonnent la prolifération et la différenciation. Des altérations de la signalisation de PP1 et des réseaux régulateurs liés à PPP1CC ont été associées à une dérégulation du contrôle de la croissance et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles prolifératifs.

PP1γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPP1CC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PP1γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPP1CC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPP1CC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PP1γ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPP1CC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PP1γ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PP1γ dans les cellules tumorales présentant une expression de PPP1CC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.